Capillaire elektroforese
Uit Wikipedia, de vrije encyclopedie
Capillaire elektroforese (CE) is een analytisch-chemische scheidingstechniek waarbij een te scheiden mengsel onder invloed van elektro-osmotische stroming (Electro Osmotic Flow, EOF) door een capillair geleid wordt.
De snelheid waarmee deeltjes (kationen, anionen en neutrale moleculen) door het capillair bewegen is afhankelijk van hun lading, massa en ruimtelijke vorm.
Deze techniek wordt met name gebruikt voor het analyseren van biologische preparaten zoals eiwit-mengsels, maar is ook geschikt voor het analyseren van andere stoffen die makkelijk ioniseerbaar zijn.
[bewerk] Opstelling
Een capillair-elektroforeseopstelling bestaat uit een capillair waarvan de uiteinden zich in twee vaatjes met bufferoplossing bevinden.
In het bron- en doelvaatje bevinden zich twee elektroden die aangesloten zijn op een spanningsbron waarmee een zeer groot spanningsverschil (15 - 50 kV) tussen de twee vaatjes aangelegd wordt.
Aan het einde van het capillair bevindt zich een detector die een respons geeft als er een component van het te scheiden mengsel passeert.
[bewerk] Monstername
Door de voorkant van het capillair gedurende een bepaalde tijd in het vaatje met de monsteroplossing te dopen komt er een kleine hoeveelheid monster in het capillair terecht.
Bij sommige monsters is de capillaire werking voldoende om het monster in het capillair te zuigen, maar meestal wordt het monster met luchtdruk het capillair in gedrukt.
Na de monstername wordt het capillair weer in het vaatje met bufferoplossing gedoopt.
[bewerk] Scheidingsprincipe
Door de hoge spanning die over het capillair staat gaat de bufferoplossing door het capillair van het bronvaatje naar het doelvaatje stromen. Dat verschijnsel wordt elektro-osmotische stroming of electro osmotic flow (EOF) genoemd.
Door die stroming wordt het monster meegenomen door het capillair. Ongeladen (neutrale) deeltjes bewegen daarbij met dezelfde snelheid als de EOF. Positief geladen deeltjes in het monster worden aangetrokken door de kathode en zullen dus sneller bewegen dan de EOF terwijl negatief geladen deeltjes juist afgestoten worden door de kathode. Negatief geladen deeltjes bewegen dus langzamer dan de EOF.
Behalve van de lading is de snelheid waarmee de verschillende deeltjes bewegen ook afhankelijk van hun massa: hoe lichter het deeltje, hoe groter het verschil in snelheid met de EOF. Lichte positieve deeltjes bewegen dus zeer snel ten opzichte van de EOF terwijl lichte negatieve deeltjes juist sterk vertraagd worden ten opzichte van de EOF.
