Coloração de Kinyoun
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O método de coloração de Kinyoun é uma técnica de coloração similar à coloração de Ziehl Neilsen, mas realizada a frio.
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[editar] Método[1]
- Prepara-se um esfregaço homogêneo, delgado e identificado em uma lâmina nova desengordurada, limpa e seca.
- Deixa-se secar à temperatura ambiente.
- Fixa-se o material do esfregaço passando 3 a 4 vezes pela chama de um bico de Bunsen.
- Cobre-se a totalidade da superfície do esfregaço com solução de fucsina fenicada de Kinyoun, previamente filtrada ou filtrada sobre as lâminas no momento da coloração, deixando agir por cerca de 5 minutos, adicionando mais corante se preciso dentro deste período, evitando que a lâmina seque.
- Lava-se em água corrente para eliminar a fucsina excedente. Toma-se a lâmina pelo extremo numerado, inclina-se para frente e lava-se deixando cair um jato d’água de baixa pressão sobre a película corada, de maneira que essa não se desprenda.
- Cobre-se toda a superfície do esfregaço com a solução de álcool-ácido. Toma-se a lâmina entre o polegar e o indicador e faz-se um movimento de vai-e-vem, de modo que o álcool-ácido vá descorando suavemente a fucsina. Se o esfregaço estiver ainda com a cor vermelha ou rosada, descora-se novamente. Considera-se descorado o esfregaço, quando suas partes mais grossas conservarem somente um ligeiro tom rosado. Essa operação dura, em geral, dois minutos.
- Terminada a fase de descoloração e eliminado o álcool-ácido, lava-se a lâmina da mesma forma como se procedeu depois da coloração com a fucsina, com cuidado para não desprender a película.
- Cobre-se toda a superfície do esfregaço com solução de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto.
- Lava-se, da mesma forma como se indicou para a fucsina, tanto o esfregaço como a parte inferior da lâmina.
- Coloca-se a lâmina com o esfregaço para cima, sobre papel limpo, para secar à temperatura ambiente ou em estufa a 35º C.
- Observa-se ao microscópio com objetiva de imersão (100 x).
[editar] Observações
Na coloração de Mycobacterium leprae, segue-se o mesmo procedimento, mas a descoloração deve ser feita com solução de ácido sulfúrico aquosa a 4% em água, pois esse microrganismo é sensível a descoloração alcoólica.
